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猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒使用说明书

发布时间:2010/3/22 阅读:1801次  作者:佚名  来源:系办公室  录入:admin

 

【简介】

试剂盒由抗原包被的微孔板,羊抗猪酶标二抗及其它试剂制成,应用间接ELISA原理检测猪血清中抗猪瘟病毒抗体。

【用途】

猪瘟ELISA诊断试剂盒用于检测猪血清中猪瘟病毒抗体。评估猪场猪瘟疫苗免疫状况,感染猪的血清学诊断。

【原理】

本试剂盒是采用猪瘟抗原包被微孔板,在试验中,加入稀释的对照血清和待检血清,经温育后,若样品中含有抗猪瘟病毒的特异性抗体,则将与检测板上抗原结合,经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后;再加入酶标二抗,与检测板上抗原抗体复合物发生特异性结合;再经洗涤除去未结合的酶结合物,在孔中加TMB底物液,与酶反应形成蓝色产物,加入HF溶液终止反应后,用酶标仪630nm波长测定各反应孔中的OD值。

【试剂盒主要成分】

1  抗原包被板                           2块                    (96孔/块)

2  阴性对照血清                         1管                    (0.5ml/管)

3  阳性对照血清                         1管                    (0.5ml/管)

4  羊抗猪酶标二抗                       1瓶                    (20ml/瓶)

5  20倍浓缩洗涤液                      1瓶                    (30ml/瓶)

6  底物液A                             1瓶                    (10ml/瓶)

7  底物液B                             1瓶                    (10ml/瓶)

8  终止液                               1瓶                    (10ml/瓶)

9  样品稀释液                           1瓶                    (50ml/瓶)

10 血清稀释板                           2块                    (96孔/板)

11 说明书                               1张

【样品制备】

取动物全血,按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血。

【洗涤液配制】

使用前,浓缩的洗涤液应恢复至室温(25℃左右),并摇动使沉淀的盐溶解(最好在37℃水中加热5-10min),然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释(例如:每板用20 ml浓缩液加上380ml水),稀释好的洗涤液在2-8℃可以存放7天。

【样品稀释】

在血清稀释板中按1:40的体积稀释待检血清(195μl样品稀释液中加5μl待检血清)。

阳性对照和阴性对照按1:40稀释(234μl样品稀释液中加6μl对照血清)。

【注意事项】

1  试剂盒使用前各试剂应平衡至室温,使用后放回2-8℃。

2  不同批号试剂盒的试剂组分不得混用,使用试剂时应防止试剂污染。

3  不要用口移液。

4  底物液B不要暴露于强光,避免接触氧化剂。

5  检测板拆封后避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中,应尽快置于2-8℃)。

6  待检血清样品数量较多时,应先使用血清稀释板稀释完所有要检测血清,再将稀释好的血清转移到检测板,使反应时间一致。

7  浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释,如果发现有结晶加热使其溶解后再使用。

8  严格按照操作说明书可以获得最好的结果,操作过程中移液,定时和洗涤等的全过程必须精确。

【操作步骤】

1  取预包被的检测板(根据样品多少,可拆开分次使用),将稀释好的待检血清取100μl加入到检测板孔中。阴性对照和阳性对照各设2孔,每孔100μl。轻轻振匀孔中样品(勿溢出),置37℃温育30分钟。

2  甩掉板孔中的溶液,用洗涤液洗板5次,200μl/孔,每次静置3分钟倒掉,再在干净吸水纸上拍干。

3  每孔加羊抗猪酶标二抗100μl,置37℃温育30分钟。

4  洗涤5次, 方法同2。切记每次在干净吸水纸上拍干。

5  每孔先加底物液A一滴(50µl)、再加底物液B一滴(50µl),混匀,室温(18℃-25℃)避光显色10分钟。

6  每孔加终止液1滴(50μl),10分钟内测定结果(测定前在震荡器上轻轻震动一下)。

【结果判定】 在酶标仪上测各孔OD630nm值。试验成立的条件是阳性对照孔平均OD630nm值大于或等于1.0,阴性对照孔平均OD630nm值必须小于0.3。

样品OD630nm值大于0.35,判为阳性;样品OD630nm值小于0.35,判为阴性。

注意:用620-650纳米波长测定结果均有效。

【贮    存】  2-8℃避光保存

【有 效 期】  6个月

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